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                  小鼠-连环蛋白-cateninELISA试剂盒使用说明书

                  • 所属分类应用方法

                    上传时间2017/10/10

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                    文件大小45 KB

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                  • 上传公司南京森贝伽生物科?#21152;?#38480;公司进入展台
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                  资料简介

                  小鼠β-连环蛋白β-cateninELISA试剂盒使用说明书

                  本试剂仅供研究使用目的本试剂盒用于测定小鼠血清血浆及相关液体样本中小鼠β-连环蛋白β-catenin含量

                  实验原理

                  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本小鼠β-连环蛋白β-catenin水平用纯化的小鼠β-连环蛋白β-catenin抗体包被微孔板制成固相抗体往包被单抗的微孔中?#26469;?#21152;入β-连环蛋白β-catenin再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物经过彻底洗涤后底物TMB显色TMBHRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样?#20998;?#30340;β-连环蛋白β-catenin?#25910;?#30456;关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度OD通过标?#35760;?#32447;计算样品小鼠β-连环蛋白β-catenin浓度

                  试剂盒组成

                  试剂盒组成

                  48孔配置

                  96孔配置

                  保存

                  说明书

                  1

                  1

                   

                  封板膜

                  248

                  296

                   

                  密封袋

                  1

                  1

                   

                  酶标包被板

                  1×48

                  1×96

                  2-8保存

                  标准品270pg/ml

                  0.5ml×1

                  0.5ml×1

                  2-8保存

                  标准品稀释液

                  1.5ml×1

                  1.5ml×1

                  2-8保存

                  酶标试剂

                  3 ml×1

                  6 ml×1

                  2-8保存

                  样品稀释液

                  3 ml×1

                  6 ml×1

                  2-8保存

                  显色剂A

                  3 ml×1

                  6 ml×1

                  2-8保存

                  显色剂B

                  3 ml×1

                  6 ml×1

                  2-8保存

                  终止液

                  3ml×1

                  6ml×1

                  2-8保存

                  20倍浓缩洗涤液

                  20ml×1

                  30ml×1

                  2-8保存

                   

                  样本处理及要求

                  1. 血清室温血液自然凝固10-20分钟离心20分钟左右2000-3000/分仔细收集上清保存过程中如出现沉淀应再次离心

                  2. 血浆应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂混合10-20分钟后离心20分钟左右2000-3000/分仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成应该再次离心

                  3. 尿液用无菌管收集离心20分钟左右2000-3000/分仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成应再次离心胸腹水脑脊液参照实?#23567;?/font>

                  4. 细胞培养上清检测分泌性的成份时用无菌管收集离心20分钟左右2000-3000/分仔细收集上清检测细胞内的成份时用PBSPH7.2-7.4稀释细胞悬液细胞浓度达到100/ml左右通过反复冻融以使细胞破坏并放出细胞内成份离心20分钟左右2000-3000/分仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成应再次离心

                  5. 组织标本切割标本后称取重量加入?#27426;?#37327;的PBSPH7.4用液氮迅速冷冻保存备用标本融化后仍然保持2-8的温度加入?#27426;?#37327;的PBSPH7.4用手工或匀浆器将标本匀浆充分离心20分钟左右2000-3000/分仔细收集上清分装后?#29615;?#24453;检测其余冷冻备用

                  6. 标本采集后尽早进行提取提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验可将标本放于-20保存但避免反复冻融.

                  7. 不能检测含NaN3的样品NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性

                  操作步骤

                  1. 标准品的稀释与加样在酶标包被板上设标准品孔10孔在第一第二孔中分别加标准品100μl然后在第一第二孔中加标准品稀释液50μl混匀然后从第一孔第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第?#30446;ף?#20877;在第三第?#30446;?#20998;别加标准品稀释液50μl混匀然后在第三孔和第?#30446;?#20013;先各取50μl弃掉再各取50μl分别加到第五第六孔中再在第五第六孔中分别加标准品稀释液50ul混匀混匀后从第五第六孔中各取50μl分别加到第七第八孔中再在第七第八孔中分别加标准品稀释液50μl混匀后从第七第八孔中分别取50μl加到第九第十孔中再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉稀释后各孔加样量都为50μl浓度分别为180pg/ml120pg/ml 60pg/ml30pg/ml 15pg/ml

                  2. 加样分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步操作相同待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl然后再加待测样品10μl样品最终稀释度为5加样将样品加于酶标板孔底部尽量不触及孔壁轻轻晃动混匀

                  3. 温育用封板膜封板后置37温育30分钟

                  4. 配液将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

                  5. 洗涤小心揭掉封板膜弃去液体甩干每孔加满洗涤液静置30秒后弃去如此重复5次拍干

                  6. ?#29992;好?#23380;加入酶标试剂50μl空白孔除外

                  7. 温育操作同3

                  8. 洗涤操作同5

                  9. 显色?#22909;?#23380;先加入显色剂A50μl再加入显色剂B50μl轻轻震荡混匀37避光显色15分钟. 

                  10. 终止?#22909;?#23380;加终止50μl终止反应此时蓝色立转黄色

                  11. 测定以空白空调零450nm波长依序测量各孔的吸光OD 测定应在加终止液后15分钟以内进?#23567;?/font>

                  注意事项

                  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用酶标包被板开封后如未用完板条应装入密封袋中保存

                  浓洗涤液可能会有结晶析出稀释时可在水浴中加温助溶洗涤时不影响结果

                  各步加样均应使用加样器并经常校?#20113;?#20934;确性?#21592;?#20813;试验误差一次加样时间最好控制在5分钟内如标本数量多推荐使用排枪加样

                  请每次测定的同时做标?#35760;?#32447;最好做?#32431;ס?#22914;标本中待测物质含量过高样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值请先用样品稀释?#21512;?#37322;?#27426;?#20493;数n倍后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数×n×5

                  封板膜只限一次性使用?#21592;?#20813;交叉污?#23613;?/span>

                  底物请避光保存

                  ?#32454;?#25353;照说明书的操作进行试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

                  所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理

                  本试剂不同批号组分?#22351;?#28151;用

                  10. 如与英文说明书有异以英文说明书为准


                  计算

                  ?#21592;?#20934;物的浓度为横坐标OD值为纵坐标    

                  在坐标纸上绘出标?#35760;?#32447;根据样品的OD      

                  ?#28068;?#26631;?#35760;?#32447;查出相应的浓度再乘以稀释      

                  倍数或用标准物的浓度与OD值计算出标      

                  ?#35760;?#32447;的直线回归方程式将样品的OD      

                  代入方程式计算出样品浓度再乘以稀释      

                  倍数即为样品的实际浓度                  

                  标?#35760;?#32447;图   
                  此图仅供参考 

                   

                  试剂盒性能

                  1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上

                  2.批内与批见应分别小于9%11%

                   

                  检测范围                                              

                  10pg/ml - 200pg/ml                                         

                                              

                  保存条件及有效期

                  1.试剂盒保存2-8

                  2有效期6个月

                  优质产品

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