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                  科研人囊虫病£¨CYT£©酶联免疫试剂盒操作步骤

                  提供者£º上海双赢生物科技有限公司   发布时间£º2019/1/11  阅读次数£º151次   进入该公司展台

                  科研人囊虫病£¨CYT£©酶联免疫试剂盒操作步骤 

                  本试剂盒仅供研究使用¡£

                  实验原理

                  本试剂盒应用双抗体?#34892;?#27861;测定标本中人囊虫病£¨CYT£©表达¡£用纯化的人囊虫病£¨CYT£©抗体包被微孔板£¬制成固相抗体£¬可与样品中囊虫病£¨CYT£©相结合£¬经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的囊虫病£¨CYT£©抗体结合£¬形成抗体-抗原-酶标抗体复合物£¬经过彻底洗涤后加底物TMB显色¡£TMBHRP酶的催化下转化成蓝色£¬并在酸的作用下转化成最终的黄色¡£用酶标仪在450nm波长下测定吸光度£¨OD值£©£¬与CUTOFF值相比较£¬从而判定标本中人囊虫病£¨CYT£©的存在与否¡£

                  科研人囊虫病£¨CYT£©酶联免疫试剂盒组成

                  130倍浓缩洗涤液20ml×17终止液6ml×1

                  2酶标试剂6ml×18阳性对照0.5ml×1

                  3酶标包被板12孔×89阴性对照0.5ml×1

                  4样品稀释液6ml×110说明书1

                  5显色剂A6ml×111封板膜2

                  6显色剂B6ml×1/12密封袋1

                  标本要求

                  1£®标本采集后尽早进行提取£¬提取按相关文献进行£¬提取后应尽快进行实验¡£若不能马上进行试验£¬可将标本放于-20¡æ保存£¬但应避免反复冻融

                  2£®不能检测含NaN3的样品£¬因NaN3抑制辣根过氧化物酶的£¨HRP£©活性¡£

                  科研人囊虫病£¨CYT£©酶联免疫试剂盒操作步骤

                  1.编号£º将样品对应微孔按序编号£¬每板应设阴性对照2孔¡¢阳性对照2孔¡¢空白对照1孔£¨空白对照孔不加样品及酶标试剂£¬其余各步操作相同£©

                  2.加样£º分别在阴¡¢阳性对照孔中加入阴性对照¡¢阳性对照50μl¡£然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl£¬然后再加待测样品10μl¡£加样将样品加于酶标板孔底部£¬尽量不触及孔壁£¬轻轻晃动混匀£¬

                  3.温育£º用封板膜封板后置37¡æ温育30分钟¡£

                  4.配?#28023;?#23558;30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

                  5.洗涤?#30418;?#24515;?#19994;?#23553;板膜£¬弃去液体£¬甩干£¬每孔加满洗涤?#28023;?#38745;置30秒后弃去£¬如此重复5次£¬拍干¡£

                  6.加酶£º每孔加入酶标试剂50μl£¬空白孔除外¡£

                  7.温育£º操作同3¡£

                  8.洗涤£º操作同5¡£

                  9.显色£º每孔先加入显色剂A50μl£¬再加入显色剂B50μl£¬轻轻震荡混匀£¬37¡æ避光显色15分钟.

                  10.终止£º每孔加终止液50μl£¬终止反应£¨此时蓝色立转黄色£©¡£

                  11.测定£º以空白孔调零£¬450nm波长依序测量各孔的吸光度£¨OD值£©¡£测定应在加终止液后15分钟以内进行¡£

                  计算和结果判定£º

                  试验?#34892;?#24615;£º阳性对照孔平均值1.00;阴性对照平均值≤0.10

                  临界值£¨CUTOFF£©计算£º临界值=阴性对照孔平均值+0.15

                  阴性判定£º样品OD<临界值£¨CUTOFF£©者为囊虫病£¨CYT£©阴性

                  阳性判定£º样品OD值≥临界值£¨CUTOFF£©者为囊虫病£¨CYT£©阳性¡£

                  注意事项

                  1£®操作?#32454;?#25353;照科研人囊虫病£¨CYT£©酶联免疫试剂盒说明书进行£¬本试剂不同批号组分不得混用¡£

                  2£®试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用£¬酶标包被板开封后如未用完£¬板条应装入密封袋中保存¡£

                  3£®浓洗涤液可能会有结晶析出£¬稀释时可在水浴中加温助溶£¬洗涤时不影响结果¡£

                  4£®封板膜只限一次性使用£¬?#21592;?#20813;交叉污?#23613;?/font>

                  5£®底物请避光保存¡£

                  6£®试验结果判定必须以酶标仪读数为准£¬使用双波长检测时£¬参考波长为630nm

                  7£®所有样品£¬洗涤液和各种废弃物?#21152;¦°创?#26579;物处理¡£终止液为2M的硫酸£¬使用时必须

                  注意安全¡£

                  保存条件及?#34892;?#26399;

                  1£®试剂盒保存£º2-8¡æ¡£

                  2£®?#34892;?#26399;£º6个月

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