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                  日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒

                  提供者上海雅吉生物科技有限公司   发布时间2019/3/14  阅读次数55次   进入该公司展台

                    通用名日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒

                    英文名称Japanese encephalitis virus Detection Kit Real-Time PCR Method

                  包装规格25T/& 50T/

                  预期用途

                  本试剂盒利用实时荧光PCR原理定性检测乙型脑炎病毒对乙型脑炎病毒引起的感染及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义

                  检验原理

                  本试剂盒针对JEV基因组高度保守区域设计特异性引物和探针在反应体系中含JEV基因组模板的情况下PCR反应得以进行并释放荧光信号利用仪器PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出实现检测结果的定性分析

                  主要组成成份日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒

                  序号

                  组成

                  25T/

                  50T/

                  1

                  JEV RT-PCR反应液

                  375 μL×1

                  750 μL×1

                  2

                    JEV逆转录酶

                   50 μL×1

                  100 μL×1

                  3

                    JEV Taq

                   75 μL×1

                  150 μL×1

                  4

                    JEV阳性对照

                   40 μL×1

                   40 μL×1

                  5

                    JEV阴性对照

                   40 μL×1

                   40 μL×1

                  6

                  说明书

                  1

                  1

                  注阴性对照为人基因组DNA阳性对照为失去活性的JEV cDNA

                  储存条件及?#34892;?#26399;避光-20以下保存避免反复冻融?#34892;?#26399;12个月

                  适用仪器ABI 系列Bio-Rad系列Agilent Stratagene MX系列 Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR

                  样本要求

                  1.从血清或脑脊液获取样本

                  2.应避免标本间交叉污染

                  6.样品如不及时检测应于-20-80冻存标本运输应于冷?#31243;?#20214;下进行

                  检验方法日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒

                  1. 试剂准备试剂准备区

                  1从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体

                  2核算当次实验所需要的反应数n并根据如下表所示反应体?#23548;?#31639;当次实验所需要的各种试剂量

                  n =阴性对?#24080;?/font>1T+阳性对?#24080;?/font>1T+误差预留量1T+样本数

                  单反?#21495;?#21046;表每份

                  RT-PCR反应液

                  15.0 μL

                  逆转录酶

                   2.0 μL

                  Taq

                   3.0 μL

                   3在无菌离心管中加入上述试剂充分混匀后瞬时离心按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管

                  2.样本准备样本处理区

                  QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA具体操作按照其试剂盒说明书操作

                  3.加样

                  在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA5 μl终体积25 μl/管盖好PCR反应盖混匀后瞬时?#36864;?#31163;?#27169;?#36716;移到PCR仪器上阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品终体积为25 μl/管盖好PCR反应盖混匀后瞬时?#36864;?#31163;?#27169;?#36716;移到PCR仪器上

                  1取样本处理区准备好的PCR反应管放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置并记录放置顺序

                  反应体积

                  25 μL

                  通道选择

                  FAM通道采集JEV 荧光信号

                  PCR

                  反应

                  条件

                  步骤

                  条件

                  循环数

                  反转录

                   4210分钟min

                  1

                  预变性

                  953分钟min

                  1

                  预扩增

                  955s

                  5

                  5540s

                  PCR扩增

                  955s

                  40

                  5540s

                  此阶段结束时采集荧光信号

                  2按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增

                  ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正设置淬灭基团选择None

                  参考值参考?#27573;?/font>日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒

                  1.试剂盒?#34892;?#24615;判定

                  1阳性对照有典型S型扩增曲线或Ct≤35

                  2阴性对照Ct38或无Ct值线形为直线或轻微斜线无指数增长期

                  2.标本结果判定

                  1阳性标本检测结果Ct≤38或有明显指数增长期

                  2可疑标本检测结果Ct值在3538?#27573;?#20869;此时应对标本进行重复检测如重复实验结果Ct?#31561;?#22312;3538?#27573;?#20869;有明显指数增长期则判定为阳性否则为阴性

                  3阴性标本检测结果Ct38或无Ct

                  检验结果的解释

                  通道及检测结果

                  标本检测结果解释

                  FAM

                  阴性

                  标本中未检出JEV RNA

                  阳性

                  标本中检测出JEV RNA

                  检验方法的局限性

                  1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的最低检出限时可能会发生假阴性的结果

                  2. 被检样本在采集运输储存以及处理过程中操作方式不当容?#33258;?#25104;RNA?#21040;?#32780;产生假阴性结果

                  3. 样本在采集运输储存以及处理过程中发生交叉污染则容易得到假阳性结果

                  产品?#38405;?#25351;标 产品的最低检出限为102 Copies/mL产品CV≤5%

                  注意事项

                  1. 整个检测过程应?#32454;?#25353;照本说明书要求分别在试剂准备区样本处理区和PCR扩增区进行操作各区实验服仪器耗材应独立使用不能混用实验用吸头采用带滤芯吸头样本处理区应配有生物安全柜样本处理在生物安全柜中进行操作三个区应该配有紫外线?#26412;?#35013;置

                  2. 为避免RNA?#21040;?#26679;本处理过程应在0-4条件下操作且完成实验后立即上机检测样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理

                  3. 每次实验应该设置阴阳性对照

                  4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀并应瞬时离心

                  5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区并单?#26469;?#25918;

                  6. 为防止荧光干扰应避免裸手直接接触PCR反应管并应避免在PCR反应管上进行任何标记

                  7. 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置不同批号试剂不能混用

                  8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正淬灭基因选择None

                  9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒

                   

                   

                  关键词日本乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒  

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